ELISA（酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)）試劑盒是一種用于測量蛋白質(zhì)、抗體或其他分子濃度的常用檢測工具。它通常由塑料微孔板和預(yù)涂有特定抗體或蛋白質(zhì)的試劑盒組成，可以方便、快速、準(zhǔn)確地檢測樣品中目標(biāo)物質(zhì)的存在以及其濃度大小。

ELISA試劑盒代測實(shí)驗(yàn)步驟如下：

1. 實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備

試劑：預(yù)包被酶標(biāo)板、標(biāo)準(zhǔn)品、化檢測抗體、SABC工作液、顯色液、終止液等?

儀器：酶標(biāo)儀、自動(dòng)洗板機(jī)、恒溫箱、移液器等?

樣本：血清/血漿/細(xì)胞培養(yǎng)上清等，需按標(biāo)準(zhǔn)方法處理

2. 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋

準(zhǔn)備6個(gè)離心管，標(biāo)記S2-S7和blank?

各管加入200μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液，按梯度稀釋標(biāo)準(zhǔn)品?

稀釋后濃度梯度：640pg/ml、320pg/ml、160pg/ml、80pg/ml、40pg/ml、0pg/ml

3. 加樣與孵育

酶標(biāo)板孔加入50μl標(biāo)準(zhǔn)品/待測樣本

37℃孵育50分鐘?

洗板3次，每次浸泡1-2分鐘?

4. 檢測抗體反應(yīng)

每孔加入100μl化檢測抗體工作液?

37℃孵育50分鐘?

洗板3次?

5. 顯色與測定

每孔加入100μl SABC工作液，37℃孵育30分鐘?

加入TMB顯色液，避光反應(yīng)10-20分鐘

加入終止液，15分鐘內(nèi)測定450nm吸光度。

操作步驟：